Barwniki mikroskopowe

[huba021292]

Kupiłem barwniki mam po 2g eozyny i hematoksyliny do dyspozycji wodę i alkohol etylowy, jakich rozpuszczalników należy użyć i jakie stężenie należy uzyskać?
Te same pytania mam także do zieleni metylowej , fioletu krystalicznego, fuksyn zasadowej i kwaśnej, żółcieni naftolowej i nigrozyny (do barwienia przeżyciowego). Czekam na jakiekolwiek informacje, a najlepiej na jakąś książkę która wszystko wyjaśni.

Jednemu użytkownikowi można przyznać tylko jeden punkt pomógł w wątku! Proszę przestrzegać regulaminu. JakubikF

[olaś]

huba021292, ja mam teraz kupić te barwniki, a własciwie zamawiam troche tego co wymieniłeś Ty.I też mam pytanie: Jaki barwnik wybrać, taki który ładnie wybarwi mi pantofelki i inne takie żyjątka?

[_Marcin_]

huba 021292 to nie jest takie proste np. hematoksylinę rozpuszcza się w zależności od metody w alkoholu(95%) albo wodzie destylowanej, tak samo jest z eozyną.
Z pozostałymi można pokombinować i zobaczyć które roztwory dają lepsze efekty, tylko pamiętaj że stosuje się bardzo małe stężenia 0,1-0,001% i w zależności od stężenia kontroluje się czas barwienia.

nigrozyny (do barwienia przeżyciowego)

Nigrozyna jest stosowana do barwienia negatywnego bakterii
Do barwienia przyżyciowego czerwień obojętna, błękit metylenowy,toluidyny, krezolowy, zieleń Janusowa i czerń Janusowa w roztworach wodnych i jeszcze można zastosować płyn Lugola do wybarwienia glikogenu u np. drożdży, ale i tak je szybko zabije.

[huba021292]

Chcę barwić zwykła metoda H+E czytałem o stężeniu 1 lub 2% i dostosowaniu czasu barwienia. Akurat przy tej metodzie jestem już prawie zdecydowany. Co do nigrozyny wiem o barwinieniu negatywnym-czytałem w skrypcie że jest barwnik przyżyciowy, ale mniejsza o to.
Coś mi się wydaje że konkretnych informacji nie uzyskam bo są dalekie rozbieżności.

Czekam na odp w sprawie innych barwników, fiolet będzie do Grama, zieleń do przyżyciowego.

[Savok]

fiolet 1% w wodzie. musi sie mieszac conajmniej 12h albo sie nie rozpusci

[huba021292]

OK dzięki a H+E etanol tak?

[_Marcin_]

Dobra, napisze ci jak wygląda barwienie przeglądowe H+E.
Najpierw barwimy to co jest na szkiełku hematoksyliną.
Dwa przepisy:
I)Kwaśna hematoksylina Mayera
W 1l H2O dest. rozpuszcza się 1g. hematoksyliny krystalicznej, dodaje się 0,2g NaJO3.
Po rozpuszczeniu dodać 50g ałunu potasowego sproszkowanego w celu latwiejszego rozpuszczenia, następnie dodać 50g wodzianu chloralu i 1g kwasu cytrynowego.Taki roztworek barwnika przechowuje się bardzo długo, skrawki barwi się 4-10 min. całe wycinki 24-48h.Im starsza tym lepsza, tym krócej trwa barwienie.
II)Hematoksylina żelazowa Heidenheina.
Są trzy etapy:wytrawianie-właściwe barwienie-różnicowanie.
I tak, do zaprawiania i różnicowania używa się 2,5% roztworu ałunu żelazowego, właściwie ałunu amonowo-żelazowego Fe(NH4)(SO4)2*12H2O w postaci dużych fioletowych kryształów szybko wietrzejących na powietrzu.Roztwór przyrządza się tak
25g ałunu żelazowego rozpuścić w 500ml wody dest., po rozpuszczeniu dodać 8ml kwasu octowego lodowatego i 18 kropli stężonego kwasu siarkowego.Z tego można robić rozcieńczenia w zależności od potrzeb.
Barwienie prowadzi się w 0,5 lub 1% wodnym roztworze hematoksyliny, lub hematoksyliny wg Regauda:1g hematoksyliny rozpuścić w 80ml ciepłej wody dest., po ostudzeniu dodać alkoholu 95% 10ml i glicerolu 10ml.Zostawić na jakiś czas do dojrzenia barwnika,na 3-4 tyg. chroniąc przed wyschnięciem i kurzem.
A teraz tak to po kolei leci:Preparat na szkiełku lub w jakimś naczynku wytrawia się najpierw w tym ałunie w czasie 1/2-24h w temp. pokojowej lub 15 min w temp. 50 st. C.
Później opłukuje się to wodą(15-30 sekund) i barwi na szkiełkach 2-24h w temp. pokojo lub 15 min. w temp. 50 st.C. Następnie krótko się to płucze wodą destylowaną i różnicuje 1 lub 2,5% (lepiej 1%) roztworem ałunu żelazowego do momentu ukazania się wyraźnych jąder komórkowych(kontrola pod mikro co jakiś czas).I do płukania na 10-15 min pod kran.
Barwienie eozyną.Należy stosować barwianie cytoplazmy 0,5-1% roztworem wodnym eozyny przez 1-3 minut.Następnie opłukać w wodzie destylowanej przez 15sekund.
Na podstawieTechnika mikroskopowa"Stefan Bagiński
Tak to miej więcej wygląda, skomplikowana ta standardowa technika barwienia histologicznego.I można spotkać jej nieznaczne modyfikacje, co wszystko nieco utrudnia

zieleni metylowej , fioletu krystalicznego, fuksyn zasadowej i kwaśnej, żółcieni naftolowej i nigrozyny

nigrozyna - r-r wodny 1%
zieleń metylowa 1% r-r wodny w 1% r-rze kwasu octowego.Nie przyżyciowa.
CV- jak napisał Savok
fuksyna zasadowa i kwaśna najpierw chyba robi roztwór alkoholowy i rozcieńcza się go w wodzie(stężeń nie znam)

[ Dodano: Pon Lut 02, 2009 16:44 ]
Zobacz też tu

Kod: Zaznacz cały

pl.wikipedia.org/wiki/Barwienie_hematoksylin%C4%85_i_eozyn%C4%85

[huba021292]

Tak na prawdę jest mnóstwo metod wielkie dzięki narzęście mam kilka porcji barwnika więc jak się coś nie uda to nie wszystko stracone. A z ta kwaśna hematoksyliną, czy to nie dziwne
coś mi sie wydawało że ona powinna pozostać zasadowa, a nie kwaśna, ale cóż dziwne.
Hematoksylinę wezmę wg Regauda a i czy ten ałun ma inna nazwę? Nie mogę go znaleźć na chemiku.

[_Marcin_]

i czy ten ałun ma inna nazwę?

ałun amonowo-żelazowy=siarczan amonowo-żelazowy, wzór jak wyżej

[huba021292]

Uuuf. udało się zrobiłem większość r-r
zieleń metylowa jest taka niebieskozielona w r-r czy to normalne?
Po dodaniu gliceryny r-r jest jakby taki rzadszy lepiej wnikający, czy do innych barwników też można dodać odrobinę glicerolu?

[ Dodano: Czw Lut 05, 2009 16:50 ]
Eozyna
C20H8O5Br4
kupiłem taką eozynę nie zwróciłem uwagi na wzór i coś miernie rozpuszcza się w wodzie lub alkoholu ale palce słaby r-r nawet barwi. Na dnie pozostał osad, czy ona będzie nadawać się do barwienia?

[Micro_Kris]

Pytanie początkującego.Co polecacie do barwienia pierwotniaków ?

[huba021292]

Ja bym polecił jakiś przyżyciowy, wybarwiający tło lub np czerwień obojętna która wybarwi wodniczki, zieleń janusowa wybarwi mitochondria również przyżyciowo.

[olaś]

A czy są bezpieczne? Można zamówić na chemiku?