Fluorescencja

[JohnyM]

Soczewka lassaix bywała stosowana w mikroskopach polaryzacyjnych, zanim wyparły je kondensory swing-out. Poprzez przeformowanie wiązki ze zbieżnej na równoległą, daje ona bardziej spójne światło oraz umożliwia równomierne oświetlenie apertury słabych obiektywów. Ma tę zaletę nad SO, że nie pogarsza korekcji kondensora tak jak SO, co jednak ma znaczenie przy większych powiększeniach (w normalnych warunkach przy obiektywach mocniejszych niż 10x i tak jej się nie używa, jednak w mikroskopii polaryzacyjnej ma to duże znaczenie - uzyskuje się spójne światło bez obniżenia NA ale kosztem intensywności światła). Taką soczewką pokrewną do lassaix jest ta przy K51.
Ja używam jej na przerobionym na uniwersalny KPI2 do ustawiania DIC na 5x PZO.

Pickul, zazdroszczę szkiełek . Sam muszę zacząć polować na jakieś PA, najlepiej właśnie UV. Ciągle zastanawiam się czy Olympusa czy Nikona.

[Pickul]

Wycentrowałem diodę tak, że zbiera światło z środkowego punktu, jest trochę lepiej.
Przetestowałem obiektyw Olympusa D PlanApo 100/1.30 UV, mam on przesłonę do regulacji apertury /używam do DF/, spokojnie daje radę.
Na sinicach bardzo dobrze autofluoryzujących setka z pełną apreturą dobrze, po zmniejszeniu apertury nie widać nic.
Jak już wspominał JohnyM apertura to kluczowy parametr przy FL.

Czy ktoś widział, wie gdzie kupić diodę LED 5W z pojedynczym punktem świetlnym ?
Znalazłem tylko takie czteropunktowe:

[Pickul]

Dzięki Seba, zamówiłem, może w tym roku dojdzie
Pierwszy raz kupuję coś z Chin.

[Pickul]

Potrzebuje filtra barierowego: 590 nm, czy ten z fotograficzny spełni swoją funkcję ?

[JohnyM]

Do czego Ci potrzebny? Składasz nową kostkę?
Trudno powiedzieć, bo nie ma spektrum na wykresie dla tego filtra. Zazwyczaj podawany jest 50% pass, czyli to oznacza że filtr przepuszcza fale poniżej 590, nie wiadomo tylko ile. Nie wiadomo też jak zachowuje się w bliskim ultrafiolecie i dalszej podczerwieni. Jeśli będziesz miał filtr wzbudzający bandpass 590, to prawdopodobnie będziesz miał olbrzymi przeciek światła i fluorescencję ciężko będzie z tego wyłuskać.
Czyli w tym wypadku ryzyk-fizyk.

[Pickul]

Kupiłem podwójną kostkę /foto - oznaczenie po lewo/
kość jest niekompletna brakuje mi filtra barierowego /590 nm/
znalazłem jeszcze coś takiego
pierwszy z listy - po kliknięciu pokazują się parametry filtra.
Co sądzisz ?

[sebba28]

Seba napisz coś w odpowiednim wątku o swoim FL.

Pickul nic sie nie zmienilo.Poprostu umiesczam jeden niebieski filtr UV przed dioda led 3W,kondesor ciemnego pola, pod nasadka zakladam filtr (pomaranczowy) i tyle.Filtry ktore umieszczam w nasadce wymontowalem z tego slajdera.

Jest ich tam 5.

Jak zrobiłeś preparat, jesteś pewny że to nie bleed through?

JohnyM nawet nie wiem co to znaczy bleed through".Ja zrobilem taka kombinacje ze komorki zalalem plynem z fluorescencyjnego mazaka,nastepnie splukalem alkoholem i nakrylem szkielkiem.

[JohnyM]

To dość częste zjawisko, kiedy światło wzbudzające przenika za filtr barierowy: kiepskie filtry, uszkodzone powłoki interferencyjne, filtry multiband, albo celowe zabiegi wynikające ze specyfiki filtra. Wydaje się wtedy, że obiekt świeci a w rzeczywistości jest to zwykłe światło odbite.
Podejrzewałem, że tak może być w tym wypadku, bo świeci cała komórka łącznie z jądrem i organellami (co się nie zdarza w przypadku autofluorescencji, tym bardziej że te komórki takiej nie wykazują wcale, dopiero przy dalekim UV) a takie efekty byłyby przy np: DF z GIFem. Dlatego pytałem o sposób przygotowania preparatu.
Ciekawy patent z tym flamastrem, muszę też popróbować jakichś domowych specyfików, bo o profesjonalne fluorochromy bardzo trudno.

Masz diodę UV?

[sebba28]

Dzieki JohnyM za przydatne informacje.
Nie mam jeszcze diody UV,uzywam narazie zimnego LEDa 3w,filtr ktory umieszczam przed nim do wzbudzenia ,rzeczywiscie nie jest w najlepszym stanie w dodatku ma powloki lustrzane po obu stronach.
Z filtrow ktore mam jedne sa z powlokami lustrzanymi
(niebieski,zielony,pomaranczowy,czerwony),bez powlok ze slajdera (pomaranczowy,zolty,jasno zolty,niebieski) i tak sie zastanawiam czy moge cos z tego wykombinowac.
Ponizej kilka zdjec z uzyciem DF i bez,oraz ten sam glon po zabarwieniu (inne powiekszenie).

bez DF

w DF

DF

Tutaj jest filmik jak zrobic Fluorescein:

[planapo]

Natknalem sie na fajny dla poczatkujacych w FL pdf objasniajacy oznaczenia kostek, chyba stosunkowo nowy bo wspominaja o noise terminator co wprowadzono przy serii i".

[Pickul]

JohnyM mam kostkę UV (na dobrą sprawę to nie wiem) jest na niej tylko logo Leica.
Jeden filtr jest przeźroczysty, lustro przeźroczyste, drugi bardzo ciemny prawie czarny. Czarny filtr (barierowy ?) nie przepuszcza światła LED, halogenowe przepuszcza słabiutko.
Czy to kość UV ?
Pytanie bardzo nieprofesjonalne, po prostu nie wiem
Czy patrząc w okulary przy UV w ogóle coś widać czy dopiero aparat widzi obraz ?

[JohnyM]

Filtr wzbudzający powinien być praktycznie czarny (szkło pochłaniające schotta[stary typ]) albo lustrzany (powłoka interferencyjna odbijająca światło[nowy typ]), bo wycina światło widzialne. Lustro jest przeźroczyste, bo przepuszcza światło VIS a odbija UV. Barierówka powinna być przeźroczysta, bo przepuszcza VIS a odbija UV - czyli tak jak u ciebie.

Eventualnie może to być kosta V - bo przepuszcza trochę halogenu.

Normalnie emisję z fluorescencji UV widać w okularach - bo nadaje światło V, B (głównie), G i R - ale halogen nie ma wystarczająco dużo UV i V do wzbudzenia fluorescencji (u mnie już na kostce V nie daje rady - tu używam HBO, ale ostatnio zdechł mi zasilacz i jestem aktualnie bez fluorescencji ).

Aparat może zobaczyć oczywiście więcej - duże iso i długi czas.

[Pickul]

Dziękuje bardzo