enzymy restrykcyjne i takei tam bajery

[u3a]

Witam.
Czytałam ostatnio troszkę o klonowaniu, enzymach restrykcyjncyh itd ale nie kumam kilku spraw. CO oznacza że zostawiają lepkie końce o rozcięciu nici (jak rozumiem- każdje pojedynczej osobno) ? Czy to oznacza że na obu końcach takiej nici zostawiają kilka nukleotyd z zasadami komplementarnymi tak, że oba końce mogły by się z powrotempołączyć"?

Co to znaczy że wektor ma miejsce rozpoznawane i przecinane przez enzym użyty do trawienia nici DNA? Dlaczego musi być rozpoznawany właśnie przez ten enzym?

I co rozumieć przez to, ze ma marker, aby został rozpoznany w komórce, np drożdży. W jaki sposób wprowadza się taki marker i czym on może być?

[ika006]

Restryktazy mogą rozcinać nici DNA symetrycznie, albo niesymetrycznie- czyli jedna nic w jakimś miejscu, a druga nieco dalej. Przez to niesymetryczne rozcięcie jest tak, że powdują, że powstają nierówne odcinki DNA- to właśnie będą końce lepkie.

Poszperałam w książce i udało mi się znaleźć przykład żeby to zoobrazować

AATTC.3
G.5 to jest właśnie lepki koniec

5.G
3.CTTAA

[ Dodano: Pią Kwi 24, 2009 10:44 ]

Co to znaczy że wektor ma miejsce rozpoznawane i przecinane przez enzym użyty do trawienia nici DNA? Dlaczego musi być rozpoznawany właśnie przez ten enzym?

Jest bardzo dużo wektórw i restryktazy zaprzyjaźniają się z konkretnym wektorem, ponieważ rozpoznają konkretną sekwencje nukletydów wektora.
Miejsce rozpoznania to właśnie jakaś sekwencja nukleotydów, którą rozpoznaje restryktaza

[ Dodano: Pią Kwi 24, 2009 10:47 ]

co rozumieć przez to, ze ma marker, aby został rozpoznany w komórce, np drożdży. W jaki sposób wprowadza się taki marker i czym on może być?

Pamiętam o genach markerowych, które są genami warunkującymi odporność na antybiotyki.

[yeast]

Marker to jest gen kodujacy jakas ceche, ktora moze byc wykorzystana do szybkiej selekcji komorek posiadajacych transgen. Moze byc to marker selekcyjny (wspomniany gen odpornosci na antybiotyki) albo inny gen np. powodujacy swiecenie (GFP) lub kolorowa reakcje z jakims substratem (beta-galaktozydaza). Stosuje sie je poniewaz wydajnosc transgenezy nie jest zbyt wielka, wiec musi byc jakis sposob, aby szybko zidentyfikowac komorki, ktore posiadaja ten transgen.

[u3a]

dziękuję pięknie