Witam. Czy ktoś rozumie ten proces i byłby w stanie go wytłumaczyć? Potrzebuje go do rozwiązania pewnego bardzo ciekwego zadania:
Twoim zadaniem jest wklonownie określonego fragmentu DNA do wektora ekspresyjnego.W laboratorium SA dostępne 3 enzymy restrykcyjne: Eco RI,Bam HI, Hind III. Miejsce wielokrotnego klonowania MCS wektora ekspresyjnego zawiera miejsca ciec dla Not I, Xma I, Bam HI i Sac I. Fragment który chcesz wstawic do wektora nie zawiera miejsca ciecia dla zadnego z wymienionych enzymow restrykcyjnych.Opisz w jakis sposób wykonasz zadanie i jak sprawdzisz czy wstawka wklonowala się we właściwej orientacji.
Nie mam pojęcia jak się za to zabrać. Czy ma ktos jakis pomysł? Z góry dzięki.
Czy ktos rozumie proces wklonowywania DNA do wektora?
Re: Czy ktos rozumie proces wklonowywania DNA do wektora?
Witam, pewnie już za poźno ale ja bum zrobił tak:
1) namnożyć wstawkę PCRem - startery do interesującego nas odcinka + overhangi 5 zawierające sekwencje rozpoznawaną przez BamHI GGATCC (ten enzym bo mamy go w labie + mam miejsce cięcia w MCS na wektorze)
2) trawienie produktu PCR BamHI - powstają nam lepkie końce 5´ - GATC
3) trawienie wektora BamHI
4) ligacja wstawki i wektora
oczywiście każdą reakcje sprawdzamy na żelu (kontrole!)
5) prawidłowa orientacja wstawki - analiza in silico w programie np. clone. Wybieramy enzym mający niesymetryczne miejsce cięcia w obrębie wstawki, a drugie gdzieś a wektorze i porównujemy wielkość produktów na żelu
1) namnożyć wstawkę PCRem - startery do interesującego nas odcinka + overhangi 5 zawierające sekwencje rozpoznawaną przez BamHI GGATCC (ten enzym bo mamy go w labie + mam miejsce cięcia w MCS na wektorze)
2) trawienie produktu PCR BamHI - powstają nam lepkie końce 5´ - GATC
3) trawienie wektora BamHI
4) ligacja wstawki i wektora
oczywiście każdą reakcje sprawdzamy na żelu (kontrole!)
5) prawidłowa orientacja wstawki - analiza in silico w programie np. clone. Wybieramy enzym mający niesymetryczne miejsce cięcia w obrębie wstawki, a drugie gdzieś a wektorze i porównujemy wielkość produktów na żelu
Re: Czy ktos rozumie proces wklonowywania DNA do wektora?
Lepiej późno niż wcale dlatego serdeczne dzięki za odpowiedź:)
-
- Podobne tematy
- Odpowiedzi
- Odsłony
- Ostatni post
-
- 0 Odpowiedzi
- 3250 Odsłony
-
Ostatni post autor: anecia3001
30 sty 2016, o 21:07
-
- 2 Odpowiedzi
- 4099 Odsłony
-
Ostatni post autor: Axsiu
25 paź 2019, o 15:15
-
-
[Film] Co integruje proces funkcjonowania komórki?
autor: szymon » 6 kwie 2019, o 23:30 » w Nauki przyrodnicze - 0 Odpowiedzi
- 6396 Odsłony
-
Ostatni post autor: szymon
6 kwie 2019, o 23:30
-
Kto jest online
Użytkownicy przeglądający to forum: Obecnie na forum nie ma żadnego zarejestrowanego użytkownika i 1 gość