za duży plazmid na metodę alkaliczną?

[leonia]

Witam,

transformowałam E.coli DNA izolowanym z drożdży zawierającym m.in plazmidy z bankiem drożdżowym. Z tak otrzymanych trnasormantów metodą lizy alkalicznej wyizolowałam plazmidy (miałam zamiar te z bankiem drożdżowym) wytrawiłam przez noc odp enzymem ale wynik elektroforezy mnie zaskoczył. Nie było widać prążków wstawki z banku. był tylko 1 prążek. Czy jest możliwość, że szukane przeze mnie wektory z banku sa zbyt duże jak na izolację metoda lizy alk.? Czy ta metoda ma jakieś ograniczenia wielkościowe co do plazamidów? Czy ewentualnie izolacja za pomocą kolumn była by lepsza?

[agentka]

Spróbuj wyizolować kolumnami, sama jestem ciekawa, czy wyjdzie .

[merai]

A mnie się wydaje, że w tym doświadczeniu jest wiele kroków, które mogą nie wypalić - np, transformacja. Jesteś pewna, że to odpowiednie DNA udało Ci się wrzucić do bakterii?