Fluorescencja

Szczegółowe dyskusje o wszelkich technikach obserwacji - kontrast fazowy, ciemne pole, kontrast DIC, i inne; Rheinberg illumination i skośne światło; przeróbki i domowe sposoby modyfikujące możliwości obserwacyjne;
Awatar użytkownika
przyrodnik
Moderator w spoczynku
Posty: 551
Rejestracja: 14 lip 1997, o 01:00

Re: Fluorescencja

Post autor: przyrodnik » 7 wrz 2013, o 22:18

JohnyM pisze:Jeśli ktoś będzie oświetlał tylko światłem niebieskim to od 30-300zł (w zależności od mocy i długości fali). Jeśli chcemy osiągnąć pełne spektrum, to będzie ich potrzeba 10-20sztuk - do tego ze 2-3 zasilacze (przy mojej nikłej wiedzy z elektroniki) .
o jakiej mocy mówimy, 1 dioda/1 moduł LED = 1W, 10W, więcej?

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 8 wrz 2013, o 18:15

Ledy różne, w zależności od emitowanego spektrum , średnio 5W (UV poniżej 1W, V 1W). Mocniejszych się nie opłaca, bo to po prostu kilka słabszych diód na jednej płytce, a kolektor wykorzysta i tak tylko jedną. Jeśli jednak zmieścimy wszystkie 4, to w środku będziemy mieli brzydki czarny krzyż, który rozbić można jedynie dość silną matówką (a straty świetlne są takie, że wychodzi na to jakbyśmy i tak korzystali tylko z jednej.)

Awatar użytkownika
przyrodnik
Moderator w spoczynku
Posty: 551
Rejestracja: 14 lip 1997, o 01:00

Re: Fluorescencja

Post autor: przyrodnik » 8 wrz 2013, o 19:08

pytam bo widziałem na ebayu z Chin:
1W High Power Yellow LED 585-595nm 0,99$
1W Royal Blue High Power LED 450nm 0,99$
1W High Power LED Blue Star Emitter 460-470nm 0,99$
1W High Power LED Green Star Emitter 520-530nm 0,99$
1W Ultra Violet UV Purple High Power LED 385nm-400nm 2,99$
1W Ultra Violet UV Purple High Power LED 420nm 3,99$

gotowe drivery na 12V do każdej diody w cenie 0,99$/szt

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 8 wrz 2013, o 20:09

Te chińskie UV to tak naprawdę V. Znalazłem diody prawdziwie UV ale są słabiutkie. Może niedługo spróbuję zakupić i zobaczymy jak działają, ale docelowo jednak wybrałem metalohalogen. Wada diody UV to jeszcze to, że ma bardzo wąziutki pik, żródło światła około 350-390nm byłoby znacznie wygodniejsze. W większości przypadków w świetle VIS także przydałoby się szersze spektrum. Trzeba jeszcze zaznaczyć, że 1W diody niebieskiej wcale nie jest równy 1W diody np: czerwonej.

Edit: gdybyś planował zakup z chin, to chętnie się dołączę. Do tej pory próbowałem na 3W i 5W krajowych", które były znacznie droższe. zobaczymy jak pójdzie na 1W. W niemcach są też dostępne inne spektra, ale dużo droższe.

W Polsce dostępne są 3 i 5W po około 30zł: 465, 525, 560, 593, 605, 625nm. Są też słabsze i droższe 405, 380, 375, 365nm. Korzystając z nich wszystkich potrzebne są 3 zasilacze (lub jeden fikuśny z regulacją?). Dokupując resztę w Niemczech, można osiągnąć pełne spektrum i potrzebne byłyby jeszcze kolejne dwa zasilacze.
No i teraz trzeba to jakoś zmyślnie sprzęgnąć, żeby zmiana oświetlenia niebyła zbytnio kłopotliwa.

Awatar użytkownika
przyrodnik
Moderator w spoczynku
Posty: 551
Rejestracja: 14 lip 1997, o 01:00

Re: Fluorescencja

Post autor: przyrodnik » 9 wrz 2013, o 20:15

JohnyM pisze:gdybyś planował zakup z chin, to chętnie się dołączę.
kilka dni wcześniej zakupiłem te diody, moduł laserowy, drivery na 12V i stabilizowany zasilacz, ale prawdopodobnie za 2-3 tyg. będę chciał jeszcze dokupić diody 365nm, dam znać

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 27 wrz 2013, o 17:12

Szybki test Epi FL od Zeissa.

W założeniu zestaw miał być zamocowany do Delty, ale mocowanie prawie idealnie pasuje do Biolara.
Zestaw optycznie i wizualnie bez zarzutów.
Nie mam oświetlacza, tak na szybko podpoiłem 3W żarówkę led z soczewką skupiającą.
Za obiekt testowy posłużyła fluoryzująca wskazówka z ręcznego zegarka.
Załączone fotki są mniej więcej dwukrotnie powiększone /musiałem zdemontować górną soczewkę Bertranda z FL żeby podłączyć nasadkę Biolara/
Przy prawidłowym połączeniu czyli z soczewką Ber. światła jest znacznie więcej. Ogólnie całość nastraja pozytywnie, ale do końcowych efektów i docelowego podłączenia pewnie trochę czasu upłynie.
Załączniki
01.JPG
02.JPG
03.JPG
04.JPG

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 27 wrz 2013, o 19:39

Na pewno nie jest to soczewka bertrandta Ona służy do przerzucenia źrenicy wyjściowej do płaszczyzny obrazowej (centrowanie pierścieni w KFie, czy przejście konoskopowa - ortoskopowa w polaryzacji).
Powiedz mi, co masz w drugiej kostce? Bo myślę, że jeśli dokupisz dwa elementy, to z moimi filtrami wyciągniesz z tego całe spektrum od 400nm niskim kosztem - czyli to co możesz wzbudzić halogenem / ledem.

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 27 wrz 2013, o 21:14

W zestawie są dwie kości jedna pełna (II), druga pusta (I).
Jakie elementy ?

To są takie soczewki jak w głowicy MPI5 redukujące długość tubusu do 160 mm nie wiem jak one się nazywają.
Załączniki
P1860136.JPG

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 28 wrz 2013, o 10:57

Filtr IR-cut - chyba, że twoje źródło światła nie wypromieniowuje niczego powyżej 700nm.
Lustro 50/50 albo 80/20 albo jakiekolwiek inne światło-dzielące. Ewentualnie kilka dichro.
Filtr IR-cut wstawia się gdziekolwiek pomiędzy światłem o okularami/aparatem - dzięki niemu nie ma czerwonej poświaty i rozjaśnionego tła przy fotografii (aparat wykrywa także IR niewidoczne dla oczu).
Lustro wstawiasz do pustej kostki. Możesz wstawić jedno uniwersalne 50/50 albo ze trzy-cztery dichro (przydałoby się więcej kostek). Dichro będą wydajniejsze ale. uniwersalne będzie. uniwersalne.

Filtry wzbudzające można wstawić albo do kostki, albo do slidera. Tak samo barierowy. Bardzo łatwo się nimi operuje.

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 6 paź 2013, o 19:15

Kolejny krok - podłączyłem nasadkę biolarowską 1,25X do epi FL od Zeissa.
Całość doskonale dopasowana - teoretycznie jestem w połowie drogi.
Pozostaje oświetlenie /już doświadczalnie widzę, że musi być silne/
Stosując prowizorycznie podłączoną żarówkę LED 3W, znalazłem sporo obiektów z możliwością autofluorescencji.

Na foto świecący kryształek z proszku do prania.
Jakość kiepska musiałem robić na ISO 400 i później odszumić /dla mojego aparatu ISO 400, jest nieakceptowalne/

JohnyM czy przy mojej jednej kostce dostanę tylko zieloną barwę, czy zależnie od obserwowanego obiektu mogę odbierać dwu, trzy barwny obraz ?

Co do oświetlenia to na razie nie mam pomysłu
Załączniki
P1860824.JPG

Awatar użytkownika
planapo
Posty: 5379
Rejestracja: 30 gru 2010, o 15:20

Re: Fluorescencja

Post autor: planapo » 6 paź 2013, o 19:37

czyli niedlugo bedzie sie dzialo (: gratulacje

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 6 paź 2013, o 23:06

Wątpliwe. Nie znam dokładnych charakterystyk twojej kostki, musiałbyś poszukać. Z oznaczeń wynika, że masz longpass 520, czyli teoretycznie emisja: zielony, żółty, czerwony. Jeśli uda ci się wzbudzić, to np: na chlorofilu powinieneś mieć czerwień.
Wielobarwna autofluorescencja to raczej UV - BV. Ty musiałbyś fluorochromować, choć wszystko może się zdarzyć, próbuj.
Kiepska sprawa, to wąski wzbudzający bandpass.
Mnie udało się uzyskać bi-kolor na wzbudzaniu światłem fioletowym. Np:
Jakaś tam rozciśnięta papryka. Fluorescencja na niebiesko + chlorofil z mocną czerwienią (a że było go sporo, to wyglądało ciekawie - niestety jeszcze nie miałem wtedy lustra - postaram się powtórzyć).
Ale, jeśli masz na myśli coś takiego.
To zapomnij.

Prawdopodobnie, twój aparat i fluorescencja też nie będą ze sobą współgrały.
Duże (nawet bardzo duże) ISO, dobrze zaciemnione pomieszczenie, mocne oświetlenie (dobry LED da radę) to podstawa.
Poza tym, zdjęcia jak z internetu, to już będzie potężna obróbka komputerowa. Dekonwulacja i te wszystkie inne bajery.

Na nowy rok planuję się zabierać za prostego konfokala. Planuję zacząć od budowy głowicy, która będzie równocześnie zbierać na czterech kanałach: DIC, blue, green , yellow, red - emission. Detekcja monochromatyczna, kolor będzie wstawiany komputerowo i wtedy można sobie dowolnie dobrać, wg. gustu. Głowica będzie nadawać się także do fluorescencji, konfokala i multiphotona.

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 12 paź 2013, o 15:05

Są przynajmniej dwie barwy
1. głowa larwy jętki
2. oko jw.
Zdjęcia: ISO 1600, czas naświetlania 1/2 s.,
Światło : nadal 3W LED


Pytanie, spójrzcie na pierwsze zdjęcie, okrąg jaki nakreśla głowa to miejsce które mam naświetlone, reszta pola widzenia jest nieoświetlona.
Próbowałem soczewki skupiające, okular jako kondensor itp. Problemem nie jest skupienie wiązki, być może to bardziej specyfika Epi, nie wiem to mój pierwszy górny oświetlacz . ?
Załączniki
01.JPG
02.JPG

ODPOWIEDZ