Co to jest to żółte na żelu SDS, wymywa mi się z kolumny, barwi frakcje. Może jakiś biotechnolog mnie czyta i mógłby odpowiedzieć. Czy kolumna jest przeładowana i to wymywa się nikiel? Czy to tylko z przeładowania, czy przez EDTA z buforu do dializy? Ale EDTA było mało, 0.5mM. Help
Robiłam dializę mojego białka COMT z proteazą TEV, żeby odciąć His-Tag. To po odcięciu powinno się wymywać we flow through (faza ruchoma), a nie odcięte i proteaza zostaje w kolumnie i wymywa się po użyciu buforu z imidazolem. Proteaza widoczna na drugim żelu od E7 do E14, to pod spodem to moje białko, nie wiem co to jest to na górze - E6 - E9.
Dialysis buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 0.5mM EDTA, 1mM DTT - 3h15min in room temp., 22.5h in cold room
Equilibration buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol
Ni-IDA, capacity: 10-15 mg protein/mL of resin 10mL column
Column color changed after sample application. Colour went down during elution.
Elution buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol, 250mM imidazole
żółte w żelu SDS i kolumnie Ni-IDA, czy to Nikiel się wymywa
Re: żółte w żelu SDS i kolumnie Ni-IDA, czy to Nikiel się wy
na kolumnie to nie wiem, ale jeśli chodzi o żel i te linie na dole to u mnie robi się dokładnie to samo. nie sprawdzalas buforu próbkowego? kiedy u nas w labie kolega zrobił na troszkę innych proporcjach właśnie takie linie zaczęły się pojawiać pod koniec elektroforezy
-
- Podobne tematy
- Odpowiedzi
- Odsłony
- Ostatni post
-
- 1 Odpowiedzi
- 3936 Odsłony
-
Ostatni post autor: DMchemik
8 maja 2014, o 05:57
-
-
Chromatografia kolumnowa heptanu w żelu krzemionkowym
autor: skolba » 22 maja 2014, o 15:33 » w Chemia organiczna - 0 Odpowiedzi
- 1618 Odsłony
-
Ostatni post autor: skolba
22 maja 2014, o 15:33
-
-
-
Izolacja DNA metodą elektroforezy na żelu agarozowym
autor: Biotechnolozka95 » 5 mar 2016, o 17:03 » w Biotechnologia - 0 Odpowiedzi
- 7067 Odsłony
-
Ostatni post autor: Biotechnolozka95
5 mar 2016, o 17:03
-
-
- 0 Odpowiedzi
- 16459 Odsłony
-
Ostatni post autor: dzasssta1
11 kwie 2017, o 11:00
-
- 2 Odpowiedzi
- 18674 Odsłony
-
Ostatni post autor: zdenek
11 paź 2014, o 11:28
Kto jest online
Użytkownicy przeglądający to forum: Obecnie na forum nie ma żadnego zarejestrowanego użytkownika i 9 gości