Pożywka AB

[malyandrzejek]

Witam wszystkich na forum. Czy ktoś mógłby mi pomóc, ponieważ robię pożywkę AB, dla Agrobacterium. Jednak mam problem (a może nie mam). Ponieważ pożywke tę robi się z buforu 20x i roztworu soli 20x. Po zrobieniu roztworu soli i ustaleniu pH na 7,00, roztwór ma kolor przeźroczysty. Jednak po sterylizacji w autoklawie, kolor nadal jest przeźroczysty, jednak powstaje osad (zawiesina), czerwonobrynatny. Domyślam się, że wytrąca się w ten sposób MgSO4, jednak czy to jest normalne. Proszę o pomoc, bo właściwie nie wiem czy powinno to w ten sposób wyglądać. Z góry dzięki za każdą informację. pozdrawiam.

[Savok]

Podczas autoklawowania nastepuje zakwaszenie i mozliwe ze w nowym pH ktoras sol sie wytraca. To co mozesz zrobic, to pobrac (oczywiscie jalowo) probke soli i zmierz ich pH.
Nie wiem jakie pH lubi agrobacterium, ale podejzewam ze cos kolo 5,6. Jezeli bedzie bardzo niske mozesz sprobowac doprowadzac pH przed autoklawowaniem do wyzszego niz 7,0.

Drugie czego mozesz sprobowac to przygotowac stock 10x, wtedy moze stezenie soli nie bedzie tak duze, zeby sie wytracaly, a pozywke przygotujesz tak samo tylko dolewajac mniej wody.

[malyandrzejek]

a może zamiast sterylizacji w autoklawie, lepiej byłoby przefiltrować roztwór?

[ Dodano: Sro Mar 14, 2007 09:18 ]

Nie wiem jakie pH lubi agrobacterium, ale podejzewam ze cos kolo 5,6.

to mnie zastanawia, bo wPlant Molecular Biology - Blakwell Scientific Publications, napisano żeby pH dla pożywek wynosiło 7.0-7.2.

I jeszcze jedno pytanie. Masz może jakieś ciekawe linki do stron o pożywkach bakteryjnych?

[Savok]

Nie wiem czy filtrowanie ma sens. Po pierwsze ilosc filtrow ktora musialbys zuzyc na litr czy poltora stocku bylaby strasznie duza, poza tym samo filtrowanie trwaloby strasznie dlugo. Poza tym w przypadku pozywek syntetycznych o ile formy ostatecznej sie nie autoklawuje ze wzgledu na niektore skladniki, ktore nie wytrzymuja autoklawowania, lepiej miec pewnosc, ze skladniki sa absolutnie jalowe. Filtrowanie takiej pewnosci nie daje. Chociazby spory bez problemu przejda przez filtr 20nm. Filtr jest metoda z koniecznosci jesli czegos nie mozna autoklawowac, np niektorych aminokwasow.

Niestety nie znam zadnych stron o pozywkach. Sam pracuje na kilku pozywkach syntetycznych, ale przepisy na nie zazwyczaj wedruja z labu do labu.
Jesli chcesz przepisow, to poszukaj w publikacjach naukowych dot. zagadnienia, ktore cie interesuje. Zawsze jest podany rodzai i sklad pozywki jesli nie jest to typowa pozywka typu LB czy NB. Tam znajdziesz rozne przepisy jakie ci sie tylko wymaza.

Co do pH, to moze zeczywiscie powinno ono byc zblizone do pH komorek roslinnych a nie gleby. Ale nie jestem w tym zakresie kompetentny, przykro mi.