Fluorescencja

Szczegółowe dyskusje o wszelkich technikach obserwacji - kontrast fazowy, ciemne pole, kontrast DIC, i inne; Rheinberg illumination i skośne światło; przeróbki i domowe sposoby modyfikujące możliwości obserwacyjne;
JohnyM

Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 14 sie 2013, o 21:00

Osiągnąłem już kilka malutkich sukcesów na tym gruncie, ale efekty były zbyt mizerne dla mojego aparatu, a nawet w okularach efekt nie był satysfakcjonujący. Niemniej jednak bardzo możliwe, że zbliża się spory przełom w tym temacie. Istnieje (teoretycznie) możliwość, żeby dorobić kosztem około 50zł DO KAŻDEGO mikroskopu bardzo prostą fluorescencję dia (lub jeśli jest moduł oświetlacza wertykalnego to także EPI) B / G oraz kosztem do około 1500zł (wliczając niezbędne przeróbki sprzętu) pełne spektrum od UV do granic czerwonego. Efekty powinny być w ciągu miesiąca.

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 15 sie 2013, o 16:37

hmm, ciekawe, informuj.
To dla mnie zupełnie nieznana technika, wymagająca niestety sporej wiedzy. Ale jak niskim kosztem można się będzie pobawić, wchodzę w to.

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 21 sie 2013, o 14:02

Chyba będzie sukces. Efekty już widać, ale jeszcze muszę poeksperymentować z jednym filtrem i mogę się zabierać do produkcji do mikroskopu. Zdjęcia są bardzo słabe (ale efekty w okularach bardzo ładne): robione jedną ręką z komórki, druga ręka trzymała filtr barierowy nad okularem, światło jest bardzo słabe.
Achromat PZO, oświetlane popularnym forumowym LEDem cree, filtry wzbudzające BV, filtry zaporowe różne.
(od dołu listy ze zdjęciami)
1.Zdjęcie miażdżonego liścia trzykrotki w jasnym polu
2,3. To samo ale wzbudzone światłem BV (niebiesko - fioletowe). Chlorofil świeci na czerwono. Nie udało się uzyskać ciemnego tła: wszystkie moje filtry przepuszczają światło powyżej 700nm (granica czerwonego), teoretycznie LED ma ich bardzo mało, ale praktycznie wystarczają do zagłuszenia fluorescencji chlorofilu (czerwonej) i nadaniu tłu czerwonej barwy, dlatego zastosowałem inny filtr barierowy, który przepuszcza szersze spektrum a fluorescencja chlorofili jest dostrzegalna. Rozwiązaniem jest użycie ciemnego pola (w tym wypadku niemożliwe - gruby preparat) albo dołożenie jako uniwersalnego filtra wzbudzającego czegoś w stylu IR - cut off.
4. Jakieś włókno, chyba z trzykrotki, a może paproch - w jasnym polu.
5. Włókno z zastosowaniem nieodpowiedniego filtra barierowego (jak u trzykrotki). Ładnie widać czerwoną fluorescencję.
6. Włókno z odpowiednim filtrem barierowym. Fluorescencja jeszcze widoczna, ale czerwone tło bardzo utrudnia obserwację (chlorofil już niewidoczny).
7-9. I tutaj właściwie pierwsze poprawne efekty. Widok w okularach jest naprawdę piękny, myślę że lustrzanka też już powinna go ładnie uchwycić, no ale przynajmniej na zdjęciach widać że działa. Ciemne pole, czerwona fluorescencja włókna i wyciśnięty sok roślinny. Przy okazji ładnie widać zjawisko photobleach czyli gaśnięcia fluorescencji. Po około minucie oświetlania preparatu włókno całkowicie zgasło.

Wnioski:
Działa, nawet bardzo dobrze. Trzeba się jeszcze pozbyć światła czerwonego, co powinien załatwić jeden dodatkowy filtr. Ewentualnie ciemne pole (kondensor olejowy, drukowane przesłony przepuszczają za dużo światła - fluorescencja jest tu bezlitosna). Zakres który udało mi się aktualnie uzyskać to 400-600nm (BV, B, G, Y). Koszt finalny powinien być bardzo niski.
Załączniki
dfphotoble3.jpg
dfphotoble2.jpg
dfphotobl1.jpg
włflredish.jpg
włflnob.jpg
włbf.jpg
trzykfl2.jpg
trzykFL.jpg
trzykjasne.jpg

wiedzmin
Posty: 115
Rejestracja: 7 sie 2013, o 10:44

Re: Fluorescencja

Post autor: wiedzmin » 21 sie 2013, o 14:35

do jakiego mikroskopu będziesz dorabiał tą fluorescencję?


Awatar użytkownika
planapo
Posty: 5379
Rejestracja: 30 gru 2010, o 15:20

Re: Fluorescencja

Post autor: planapo » 21 sie 2013, o 15:26

wyglada obiecujaco (:

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 21 sie 2013, o 15:42

Można dorobić do każdego, łącznie z zabawką za 50zł. Skuteczność będzie zależeć od: charakterystyki spektralnej użytego światła, intensywności, apertury numerycznej obiektywu i typu (najlepiej fluoryt). Planuję bardziej elegancko: tubus pośredni między nasadkę i rewolwer dla barierowych + jakiś system do wzbudzających na port świetlny do biolara i slidery do epivala zeissa ( oo ). Generalnie mogę wykonać do każdego mikroskopu, jeśli będą znane wymiary i tolerancje wobec długości tubusa dla obiektywów 160 / 00 .
Można też prościej, ale mniej wygodnie w postaci wkładek do miski rewolwerowej / pod nasadkę okularową (jak w PZO UFL ) co będzie napewno tańsze w wykonaniu, ale mniej ergonomiczne - ale nie wprowadzi żadnej zmiany do długości tubusa.
Teraz muszę znaleźć filtry IR-cut w rozsądnej cenie i będę myślał nad poszerzeniem o UV i V.

Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 22 sie 2013, o 07:10

JohnyM testuj, składaj i na koniec daj znać w co się trzeba zaopatrzyć, żeby pobawić się fluorescencją. Czekam z niecierpliwością.

marcin93
Posty: 449
Rejestracja: 15 cze 2012, o 14:17

Re: Fluorescencja

Post autor: marcin93 » 22 sie 2013, o 08:18

JohnyM, Właśnie daj znać, bo zapowiada się świetnie.

phpsql
Posty: 87
Rejestracja: 20 kwie 2010, o 12:53

Re: Fluorescencja

Post autor: phpsql » 22 sie 2013, o 12:33

JohnyM, Polak potrafi Z przyjemnością będę oglądał dalsze Twoje postępy w produkowaniu FJM - Fluorescencji Johnego eM".

wiedzmin
Posty: 115
Rejestracja: 7 sie 2013, o 10:44

Re: Fluorescencja

Post autor: wiedzmin » 22 sie 2013, o 12:40

Jestem mega ciekawy wyników dobrze by było jakbyś opisał w wątku proces przerabiania mikroskopu jakie fitry itd. Rób dużo zdjęć z adaptacji.


Awatar użytkownika
Pickul
Posty: 3085
Rejestracja: 23 kwie 2008, o 20:41

Re: Fluorescencja

Post autor: Pickul » 25 sie 2013, o 17:17

JohnyM znalazłem taka stronę:
może mają niedrogie filtry, nie bardzo wiem o co konkretnie pytać.

francisco
Posty: 135
Rejestracja: 9 cze 2013, o 18:14

Re: Fluorescencja

Post autor: francisco » 25 sie 2013, o 21:57

See more filters from the same seller

JohnyM

Re: Fluorescencja

Post autor: JohnyM » 31 sie 2013, o 17:32

Na dzień dzisiejszy wygląda to mniej więcej tak:
-Filtry wzbudzające w zakresie od 400 - 650nm (BV, B, G, Y, R). Pracuję jeszcze nad UV i V. Kombinacja filtrów dla BV mogłaby być troszkę lepsza, ale daje radę.
-Filtry barierowe przepuszczające tylko światło o długości fali powyżej: UV, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, i 650nm (także jeszcze przydałby się 425 i byłby pełen zestaw)
-Filtr cieplny - pochłania temperaturę, nie zmienia spektrum
-6 różnych NCB (dla różnych żarówek halogenowych) - w skrócie przekształca światło żarowe do dziennego.
-5 różnych ND - do osłabiania mocy światła (manipulowanie voltażem zmienia charakterystykę spektralną - lepiej włączyć filtry ND)

Poszukuję filtra który nie przepuszcza światła powyżej 650-700nm a ma jak najwyższą transmitancję poniżej (usunie czerwoną poświatę - można to obejść kupując np: zimny LED, ale Halogen będzie już walił czerwienią po oczach). nie wysyłajcie linków, bo takich filtrów jest mnóstwo (i są drogie), albo są trudno dostępne (choć tanie) a założenie jest takie, żeby dało się poskładać tanią i dostępną fluorescencję.

ODPOWIEDZ