żółte w żelu SDS i kolumnie Ni-IDA, czy to Nikiel się wymywa
: 20 mar 2015, o 23:09
Co to jest to żółte na żelu SDS, wymywa mi się z kolumny, barwi frakcje. Może jakiś biotechnolog mnie czyta i mógłby odpowiedzieć. Czy kolumna jest przeładowana i to wymywa się nikiel? Czy to tylko z przeładowania, czy przez EDTA z buforu do dializy? Ale EDTA było mało, 0.5mM. Help
Robiłam dializę mojego białka COMT z proteazą TEV, żeby odciąć His-Tag. To po odcięciu powinno się wymywać we flow through (faza ruchoma), a nie odcięte i proteaza zostaje w kolumnie i wymywa się po użyciu buforu z imidazolem. Proteaza widoczna na drugim żelu od E7 do E14, to pod spodem to moje białko, nie wiem co to jest to na górze - E6 - E9.
Dialysis buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 0.5mM EDTA, 1mM DTT - 3h15min in room temp., 22.5h in cold room
Equilibration buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol
Ni-IDA, capacity: 10-15 mg protein/mL of resin 10mL column
Column color changed after sample application. Colour went down during elution.
Elution buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol, 250mM imidazole
Robiłam dializę mojego białka COMT z proteazą TEV, żeby odciąć His-Tag. To po odcięciu powinno się wymywać we flow through (faza ruchoma), a nie odcięte i proteaza zostaje w kolumnie i wymywa się po użyciu buforu z imidazolem. Proteaza widoczna na drugim żelu od E7 do E14, to pod spodem to moje białko, nie wiem co to jest to na górze - E6 - E9.
Dialysis buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 0.5mM EDTA, 1mM DTT - 3h15min in room temp., 22.5h in cold room
Equilibration buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol
Ni-IDA, capacity: 10-15 mg protein/mL of resin 10mL column
Column color changed after sample application. Colour went down during elution.
Elution buffer:
50mM Tris-HCl, pH=8, 150mM NaCl, 10% glycerol, 250mM imidazole