Strona 1 z 5
Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:02
autor: voyteck
Witam, mam taką sprawę. Myślałem tak, żeby pooglądać pod mikroskopem bakterie z jogurtu. Tylko nie wiem jak sie zabarwić. Różne znalazłem instrukcje i nie wiem która jest dobra i przede wszystkim nie wiem jak to mam przemywać tym wszystkim. Po preparacie jak będę lał lugolem, etanolem i innymi płynami to nie zmyję sobie jogurtu
pozdrawiam
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:13
autor: Savok
Zmyjesz, musisz najpierw utrwalic preparat, do tego przdalby sie palnik bunsenowski lub acetylenowy. Musialbys rozmazac naprawde niewielka ilosc jogurtu na szkielku, przeciagnac nad plomieniem. Pozniej mozesz juz plukac, ale nadmiaru bakterii tam nie bedzie i wiele zalezy od jogurtu. Zacznij od nauralnych, omijaj Danone. Moze jogurt balkanski bedzie mial bardziej imponujaca flore niz inne.
[ Dodano: Pią Lis 23, 2007 21:14 ]
Aha, bakterie oglada sie pod powiekszeniem 1000x, masz olejek imersyjny? Bez tego wiele nie zobaczysz nawet pod barwieniem Grama.
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:24
autor: voyteck
Kupiłem ten mikroskop: 3-MPIXEL-USB-CAMERA-40-1600x-TRINOC-MICROSCOPE-W-CASE_W0QQ
Mam olejek imersyjny, mam obiektyw 100x i okular 16x (drugi okular mam 10x). Muszę sobie te odczynniki załatwić, bo nic nie mam. A proponujesz inne źródło bakterii, a niżeli te jogurty?
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:33
autor: Savok
Odczynniki nie sa szkodliwe i powienienes je dostac w kazdym sklepie chemicznym.
Jogurt jest bezpiecznym zrodlem bakterii i da sie je ogladac. Sam jogurt moze sprawiac troche problemu. Zeby sie go pozbyc mozesz sprobowac rozcienczyc go w 0,8% NaCl i robic preparaty z wiekszej ilosci takiej zawiesiny.
Przed utrwaleniem rozpuszczalnik powinien odparowac.
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:36
autor: voyteck
a nie mogę nad gazowym palnikiem tego utrwalać? bo nie mam dostępu do bardziej profesjonalnego sprzętu.
a co do samego barwienia, to dobra jest ta instrukcja?:
odczynniki: fiolet krystaliczny, płyn Lugola, alkohol etylowy, roztwór fuksyny zasadowej
1. Nanieść bakterie na szkiełko podstawowe.
· W przypadku wykonywania preparatu z hodowli płynnej wystarczy nanieść na szkiełko kroplę hodowli lub pobrać odrobinę bakterii jałową ezą (czyli wyżarzoną w płomieniu palnika) i rozprowadzić zawiesinę na powierzchni szkiełka.
· W przypadku wykonywania preparatu z bakterii wyrosłych na podłożach stałych należy materiał pobrać jałową ezą (czyli wyżarzoną w płomieniu palnika), następnie zawiesić bakterie w kropli soli fizjologicznej naniesionej na szkiełko podstawowe.
Zabiegi te mają na celu przygotowanie bakterii w postaci niezbyt gęstej zawiesiny. Po wysuszeniu utrwalić preparat przez przeciągnięcie szkiełka podstawowego nad płomieniem palnika. Należy uważać, żeby nie trwało to zbyt długo i żeby bakterii nie przypalić!
2. Na utrwalone bakterie nakroplić fiolet krystaliczny w ten sposób by pokrył on powierzchnię, na którą naniesiono bakterie. Barwnik pozostawić na 2 minuty. Po tym czasie zmyć fiolet wodą destylowaną.
3. Nanieść płyn Lugola na 1 minutę. Płyn spłukać obficie najpierw alkoholem etylowym, a później wodą destylowaną.
4. Nanieść na preparat roztwór fuksyny zasadowej na 40 sekund. Po tym czasie spłukać szkiełko wodą destylowaną i wysuszyć preparat. Przed umieszczeniem na stoliku mikroskopu nanieść na szkiełko kroplę olejku immersyjnego. Oglądać używając obiektywu dającego stukrotne powiększenie.
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:42
autor: Savok
Przepis jest dobry. Drobna uwaga praktyczna: pluczac nie lej prosto na preparat tylko troche powyzej. Uwazaj na fiolet, schodzi tylko wraz z naskorkiem lub stezonym acetonem. Kwasu octowego nie polecam bo powoduje oparzenia
Palnik kuchenki najwyzej opazy ciebie, a preparatu nie utrwali. Palnik na alkohol albo acetylen nie jest zlozony ani drogi i tez dostaniesz go w sklepie z odczynnikami chemicznymi.
[ Dodano: Pią Lis 23, 2007 21:46 ]
Idealny.
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 20:46
autor: voyteck
Zalazłem w jednym sklepie chemicznym takie coś:
GRAM KOLOR (Zestaw odczynników do barwienia metodą Grama. Lepiej niż metodą tradycyjną różnicuje bakterie, krótszy jest czas barwienia. W skład zestawu wchodzą: Fiolet krystaliczny roztwór, Lugol-komplex, Odbarwiacz, Safranina roztwór)
Dobre będzie?
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 21:07
autor: yeast
powinno być ok
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 21:25
autor: voyteck
bo po prostu jak dla mnie wygodniej zamówić taki zestaw odczynników niż osobno wszystko. Tylko oni piszą, że to barwienie krócej trwa. Nie wiem, czy dadzą do tego instrukcję (pewnie nie).
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 21:31
autor: Savok
trwa tyle samo, chyba ze stezenia sa wieksze, ale watpie.
Re: Oglądanie bakterii
: 23 lis 2007, o 22:39
autor: MiRACiDiUM
Savok pisze:Uwazaj na fiolet, schodzi tylko wraz z naskorkiem lub stezonym acetonem.
Spokojnie można zmyć fiolet krystaliczny 70% etanolem. przecież na tym polega jeden z etapów barwienia metodą Grama (ekstrakcja etanolem), troche gorzej z fuksyną. Poza tym nie warto się brudzić, bo te odczynniki w cale nie są obojętne dla nas.
Savok pisze:Palnik kuchenki najwyzej opazy ciebie, a preparatu nie utrwali.
Nie wiem, czemu miałby nie utrwalić? Jasne, że utrwali. tylko wyposaż się np. w łapę drewnianą, żeby się nie poparzyć. -)
Re: Oglądanie bakterii
: 24 lis 2007, o 07:03
autor: voyteck
Mam kamerę usb 3 MP do mikroskopu i taki program scope photo. W nim mogę mierzyć obiekty, ale bodajże w pixelach mi pokazuje. Nie wiecie jak to przeliczyć znając sumaryczne powiększenie na mikrometry na przykład? Jeszcze nie rozgryzłem programu.
Re: Oglądanie bakterii
: 24 lis 2007, o 12:57
autor: Savok
MiRACiDiUM pisze:Spokojnie można zmyć fiolet krystaliczny 70% etanolem.
A probowales sobie w ten sposob odczyscic kciuk? Ja sie umazalem we czwartek, etanol malo dal, dopiero acetonem jakos sie odplukalem P