Biolog.pl

witam,
pisze prace dyplomowa z dziedziny techniki swietlnej nt. lamp do fotosyntezy. Mam problem z pewnym zagadnieniem. mianowicie interesuje mnie jak wyznaczono widmo absorpcji swiatla przez chlorofil na czym polegalo to badanie, albo jak sie robi to dzisiaj?
dzieki za jakakolwiek pomoc.
pozdrawiam
Wojtek

nie jestem pewien, ale wydaje mi sie z emozna to zrobic poprzez chromatografię bibułową a następnie okreslenie kolorów barwników fotosyntetycznych i naprzykład jezeli dany barwnik jest zielony to znaczy ze odbija on swiatło zielone. więc absorbuje np. czerwone. ale to jest taka moja hipoteza i nie jestem pewnien czy tak akurat robiono ale śadze ze w ten sposób da sie co nieco określic

A czy przypadkiem widma absorbcji nie są wyznaczane za pomocą technik spektroskopowych?

Widmo absorpcji ekstraktu barwników chloroplastowych

Materiał: kilkudniowe, intensywnie zielone siewki jęczmienia
Sprzęt: lejek szklany, noŻyczki, moździerz, tłuczek, folia aluminiowa, sączki
bibułowe, rozdzielacz, cylinder miarowy 50 cm3 i 10 cm3, zlewka 50 cm3,
spektrofotometr UV-VIS 160A (pnd. firmy Shimadzu)

Odczynniki: 95% etanol

Analizę barwników chloroplastowych przeprowadza się po wyekstrahowaniu ich z tkanek roślinnych za pomocą rozpuszczalników organicznych. UŻycie rozpuszczalników jest niezbędne w związku z lipofilnymi właściwościami barwników. Jedną z podstawowych metod analitycznych stosowanych w badaniach nad barwnikami jest sporządzanie i interpretacja ich widm absorpcji. Absorpcja monochromatycznego promieniowania przechodzącego przez ho-mogenny ośrodek jest proporcjonalna do drogi optycznej li stęŻenia substancji absorbującej c, co moŻna wyrazić w postaci równania róŻniczkowego

- dl/dl = k c I

gdzie I - natęŻenie promieniowania, k - współczynnik proporcjonalności. Poprzez scałkowanie powyŻszego równania otrzymuje się

log Izero/I = c l

gdzie I zero/ I oznacza stosunek natęŻenia promieniowania padającego do natęŻenia promieniowania przepuszczonego.

JeŻeli c wyraŻone jest w molach • dm3, a droga optyczna w cm, to współczynnik proporcjonalności nosi nazwę molowego współczynnika absorpcjiound. Wielkość log I0/I nazywana jest absorbancją A i moŻe być rejestrowana przez spektrofotometr. Widmem absorpcji nazywamy krzywą obrazującą zaleŻność miedzy absorbancją próbki A a długością fali [lambda] przy której absorbancją jest rejestrowana. Pasma absorpcji zlokalizowane w widzialnej części widma powstają na skutek wzbudzania elektronów cząsteczek próbki. W związku z tym analiza długości fal odpowiadających maksimom absorpcji obserwowanym w widzialnej części widma określonego związku pozwala uzyskać istotne informacje dotyczące struktury elektronowej cząsteczek tego związku. Analiza widm absorpcji jest ponadto wykorzystywana do określania stęŻeń i identyfikacji związków.
Wykonanie:
Około 2 g świeŻych liści jęczmienia tniemy na drobne kawałki i rozcieramy tłuczkiem z niewielką ilością piasku kwarcowego, stopniowo dodajemy 5 cm3 95% etanolu. Po uzyskaniu jednolitej masy dodajemy jeszcze 20 cm3 etanolu, mieszamy, odstawiamy na około 30 min i przykrywamy moździerz folią aluminiową. Homogenat sączymy przez sączek fałdowany do osłoniętej folią aluminiową zlewki. Ekstrakt barwników rozcieńczmy 10-krotnie za pomocą 95% etanolu i rejestrujemy widmo absorpcji na dwuwiązkowym spektrofotometrze UA-VIS 160A prod. firmy Shimadzu. SprzęŻona ze spektrofotometrem drukarka drukuje widmo, zaznaczając połoŻenie maksimów i minimów absorpcji.

Otrzymujesz widmo, w ktorym pierwsze maksimum to barwa niebieska (ok. 500_, drugie maksimum to barwa czerwona (przy 700), miedzy nimi wystepuje tzw. siodlo (barwa zielona przy ok 550).

fragment pochodzi z podrecznika do Cwiczen z Fizjologii roslin, praca zbiorowa UAM
Poznan 2004.