Wodrębnianie struktur komórkowych i elektoforeza żelowa

[kasia91]

Proszę o pomoc w opracowaniu odpowiedzi na następujace pytania (w formie 1, 2 zdań)
1. Wyjaśnij, na czym polega metoda rodzdzelania orgaelli komórkowyhc nazywana wirowaniem różnicowym.
2. Napisz, dlaczego próbka jest homogenizowana przez wirowaniem
3. Wyjasnij, dlaczego próbka musi znajdować sie w roztwódze, który jest:a) z nią izotoniczny, b) schłodzony, c) zbuforowany
4. wyjaśnij, jaki jest cel sosowania inżynierii genetycznej
5. wyjasnij jaki jest cel przeprowadziania procesu elektoforezy żelowej
6. napisz, od czego zależ prędkość z jaką przemieszczają się w żelu poszczególne fragmenty DNA

[_Marcin_]

1. Wyjaśnij, na czym polega metoda rodzdzelania orgaelli komórkowyhc nazywana wirowaniem różnicowym.

Polega to na rozdzieleniu homogenatów komórkowych na ich składniki.Rozdział ten umożliwia frakcjonowanie składników komórkowych zależne od ich wielkości i gęstości,
składniki gęstsze pod wpływem większej siły odśrodkowej zbierają się na dnie probówki.
Nastepnie płyn z nad osadu(supernatant) poddaje się wirowaniu z większą prędkością, znów powstaje osad i procedurę można powtarzać aż do otrzymania homogenicznego osadu białek czy rybosomów.

2. Napisz, dlaczego próbka jest homogenizowana przez wirowaniem

Homogenizacja jest sposobem na uwolnienie zawartości komórek przez rozbicie błony komórkowej.W zależności od procedury wyróżnia się: sonikację, permeabilizację, rozcieranie, wytrząsanie czy też trawienie enzymatyczne.

5. wyjasnij jaki jest cel przeprowadziania procesu elektoforezy żelowej

Głównym celem jest rozdzielenie w przyłożonym polu elektrycznym cząsteczek obdarzonych ładunkiem.Szybkość ruchu zależy od masy i topologii cząsteczki np. DNA lub białka, a kierunek od wypadkowego ładunku.

6. napisz, od czego zależ prędkość z jaką przemieszczają się w żelu poszczególne fragmenty DNA

Głównie od ich wielkości,oraz w mniejszym stopniu od tego czy są liniowe/kuliste oraz zrelaksowane/ superhelikalne.

4. wyjaśnij, jaki jest cel sosowania inżynierii genetycznej

Tu chyba głównie tworzenie roślin i zwierząt lub mikroorganizmów o nowych, korzystnych
dla czlowieka cechach. Powodem tego jest wprowadzanie nowych genów do genomów organizmów tzw.transgenów.Odgrywa rolę w poznawaniu budowy,struktury genów oraz mechanizmów regulujących ich aktywność.

[Jakusz]

1. Organella rozdzielane są pod względem ich masy w ośrodku o odpowiedniej lepkości. Zjawisko wirowania różnicowego w tym przypadku pod względem masy, opisuje stała sedymentacji. Ogólnie rzecz mówiąc, organella podczas wirowania poruszają się z różną prędkością specyficzną dla organellum co w konsekwencji doprowadza do ich rozdziału. Wpływ na ten proces ma również kształt organellum.

2. Aby rozdzielić organella musimy je wydobyć z komórek a zatem zdezorganizować ich błony komórkowe - tj. dokonać lizy komórek.

3. a) aby nie następowało np. napływanie wody do organelli błoniastych (mitochondria, plastydy etc.) co mogłoby doprowadzić do ich rozbicia, a także w drugą stronę, aby nie następowało kurczenie się tychże struktur.

b) chodzi o zachowanie białek w formie natywnej

c) zachowanie niezmiennego pH środowiska.

[Savok]

1. Obaj zgubiliscie fakt, ze wirowania dokonuje sie w gradiencie gestosci, dzieki czemu DOKLADNIE wiemy na jakiej wysokosci znajduja sie jakie kawalki komorki. Zatrzymaly sie na granicy odpowiadajacej im gestosci. Probka nie jest homogenizowana, bo jak sam termin wskazuje, calosc bylaby jednorodna. Do izolacji organelli stosuje sie delikatna lize rozrywajaca wylacznie blone komorkowa i nienaruszajaca mitochondriow (roztwor izortoniczny z mitochindriami).

[Jakusz]

Racja, bez gradientu jest trudniej, bo pozwala on na jeszcze większe zróżnicowanie i rozdzielenie organelli. A czy bez gradientu nie uzyskalibyśmy wyraźnych warstw? Jeśli tak to byłyby one homogeniczne pod względem jakościowym? Jak dobiera się gęstość warstw do odpowiednich organelli, bo trzeba jakoś gradientwyskalować".

Domyślam się, że to wychodzi z obliczeń, ale ciekaw jestem czy wiesz z którego z tajemniczych wzorów biofizycznych należy skorzystać w przypadku takich struktur jak organella. Wiem jak ma się to do cząsteczek takich jak DNA, czy białka, ale nie organella.

[Savok]

Vide Sambrook ManiatisMolecular cloning".
Czyt. nie mam pojecia.

[Medycyna Lwów]

jestem czy wiesz z którego z tajemniczych wzorów biofizycznych należy skorzystać w przypadku takich struktur jak organella.

wątpię czy takie są, bo musiały by w nim być mnóstwo zmiennych.